Диагностика методом полимеразой цепной реакции (ПЦР)

Диагностика методом полимеразой цепной реакции (ПЦР)

ПЦР — диагностика состоит из 3 основных процедур: подготовки исследуемой пробы материала, которая сводится к выделению ДНК или РНК, собственно полимеразной цепной реакции и детекции продукта ПЦР.

При этом чужеродный генетический материал многократно копируется в пробирке при помощи ДНК-полимеразы, а затем миллионные количества копий специфических фрагментов ДНК регистрируются визуально.

Это позволяет при ПЦР — диагностике обнаруживать даже единичные клетки бактерий или вирусов. Или в такой сложной ситуации, когда нужно обнаружить возбудителей с высокой антигенной изменчивостью или паразитирующих внутри клетки — их очень трудно обнаружить другими методами.

А быстрота исследования определяется тем, что не требуется долго выделять и выращивать возбудителя, чтобы найти его — процесс стандартизирован и автоматизирован вплоть до подготовки пробы для выделения нуклеиновой кислоты из бактерии или вируса, что одновременно сводит к минимуму вероятность ошибок, связанных с ручной подготовкой и тестированием проб. Результат может быть получен в течение нескольких часов, и при положительном ответе ПЦР — диагностики обычно выражается по четырехбальной шкале от одного до четырех плюсов.

ПЦР — диагностика универсальна и тем, что позволяет обнаружить чужеродное ДНК в самых различных биологических тканях — слизи, моче, крови, мокроте, соскобе эпителиальных клеток. И будут определены все возбудители, ДНК которых присутствовали в исследуемом материале. Особенную популярность ПЦР — диагностика приобрела для выявления инфекций, передаваемых половым путем, особенно скрытых или хронических — хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, гарднереллеза, микоплазменной инфекции. Их возбудителей как раз труднее всего выявить классическим путем выращивания клеток в лабораторных условиях, да и антитела в серологических реакциях могут мало определяться.

А исследовав соскоб эпителия уретры или канала шейки матки, (в случае необходимости берется и другой материал (секрет простаты, моча и т. д.), можно получить точные признаки наличия именно той или иной инфекции, так как размножению подвергается только ДНК бактерии, а не сама бактерия.

Также с помощью ПЦР — диагностики исследуются вирусы — такие, как вирус папилломы человека, для чего берется соскоб папилломатозных элементов, а для ПЦР — диагностики вирусных гепатитов производится забор крови из вены. Здесь же нужно не забыть о ПЦР — диагностике ВИЧ, особенно врожденной ВИЧ- инфекции.

Реже ПЦР — диагностика применяется для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулеза, дифтерии, для выявления геликобактериоза в гастроэнтерологии, для определения цитомегаловирусной инфекции и онковирусов.

Но выявление инфекционных заболеваний, оценка их вирулентности и устойчивости к антибиотикам — только одна из возможностей ПЦР — диагностики. Она позволяет также проводить генетическую дактилоскопию, пренатальную диагностику и многое другое. Точечные мутации генного материала ведут к возникновению различных болезней, которые передаются по поколениям (например, наследственная предрасположенность к некоторым видам рака), или являются причиной детской смертности и инвалидности. Современные методы пренатальной диагностики или скрининга носительства призваны помочь решить проблему путем своевременного выявления поврежденной ДНК. ПЦР — диагностика и в этом случае доказывает свою ценность. Несмотря на то, что ПЦР- диагностика является высокоспецифичным методом, при ней также возможны ложно-положительные результаты, связанные с попаданием в материал исследования чужой ДНК и ее копий через предметы и реагенты. Предупреждается это правильной организацией исследования, с соблюдением ряда правил.

Например, учет продуктов ПЦР- диагностики должен проводиться в изолированной комнате сотрудником, не производящим обработку образцов и не готовящим реактивы для ПЦР — диагностики. Приготовление основных растворов также должно производится в отдельной чистой комнате. Все растворы должны храниться и использоваться в небольших порциях. Необходимо постоянно использовать лабораторные контроли и периодически применять зашифрованные отрицательные и положительные контрольные образцы для оценки специфичности и чувствительности ПЦР — диагностики. Также в настоящее время хорошо апробированы и применяются в ПЦР- диагностике методы ферментативного и химического предупреждения ложно-положительных результатов, когда амплификоны разрушаются определенными ферментами или повреждаются ультрафиолетовыми лучами, к которым становятся чувствительны под действием химических соединений.

Список проводимых ПЦР-исследований на наличие:

вируса папилломы человека высокого онкогенного риска;
хламидий;
микоплазмы;
уреаплазмы;
вируса простого герпеса;
цитомегаловируса;
вируса гепатита В, С и т.д.

Возврат к списку